¿Qué es un resumen de restricción?

Limitación La digestión es la forma de cortar los átomos de ADN en piezas más pequeñas con catalizadores poco comunes llamados Endonucleasas de Restricción (de vez en cuando, simplemente llamadas Enzimas de Restricción o RE).

Los compendios de confinamiento comienzan combinando el ADN y el RE, sin embargo, lamentablemente no es exactamente tan básico como eso. Confinamiento Las enzimas son sensibles y deben tratarse con precisión.

Dado que los productos químicos son proteínas y las proteínas se desnaturalizan a medida que se expande la temperatura, las RE se guardan constantemente en un refrigerador hasta el punto en que se utilizan. A decir verdad, la mayor parte de las fijaciones en un Restriction Digest son hielo continuo hasta que es la oportunidad ideal para que comience la respuesta. Las condiciones de respuesta genuinas cambian comenzando con un compuesto y luego con el siguiente, e incorporan temperatura, NaCl así como también fijación de MgCl2, pH, y más. Estos factores, además de la temperatura, se potencian mezclando la sustancia química y el ADN con un soporte específico para la proteína de decisión.

Cuando cada una de las fijaciones se mezcla en el tubo de respuesta, el tubo se incuba a la temperatura ideal de la Enzima de Restricción durante 1 hora o más. En ese momento, por fin, cuando el proceso se ha mantenido funcionando durante la medida de tiempo adecuada, el tubo de respuesta se devuelve en hielo para evitar la corrupción inespecífica de su ADN. Una vez que finaliza el Restriction Digest, se realiza la electroforesis en gel de agarosa para aislar las secciones del proceso por medida e imagen de las partes y tal vez purgarlas para análisis adicionales.

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