La medición del número de orgánulos mitocondriales o la masa mitocondrial varía según los tejidos que se analizan y existen algunas técnicas que podrían ser útiles. (Estoy asumiendo que no se refiere al número de copia de mtDNA aquí, que es mucho más directo pero debe ser normalizado para una interpretación precisa)
Las mitocondrias se pueden preparar mediante una suave homogeneización del tejido en sacarosa isotónica, esto minimiza la agregación y proporciona soporte osmótico. Posteriormente seguido de centrifugación diferencial, esto separa las mitocondrias de los núcleos, restos celulares, etc. Este método es efectivo con tejidos frágiles (p. Ej. Hígado), pero los tejidos más duros (p. Ej., El corazón) deben incubarse primero con una proteasa como nagarse o mezclarse brevemente para romper las fibras musculares. Las mitocondrias preparadas a partir de células de levadura también son diferentes, ya que la pared celular se digiere con una enzima snail-gut seguida de disrupción física (centrifugación).
Para determinar el volumen de la matriz, la centrifugación del aceite de silicona es un enfoque ampliamente utilizado. Las mitocondrias se incuban en medio con 14C-sacarosa y 3-superíndice-H2O. Las mitocondrias forman un gránulo debajo del aceite y pueden solubilizarse para el recuento de centelleo líquido junto con una parte alícuota del sobrenadante. La 14C-sacarosa permite el espacio permeable a la sacarosa y la diferencia entre el sedimento 3-superíndice-H2O y esto da al espacio impermeable a la sacarosa representativo del volumen de la matriz. Esta técnica se puede aplicar para determinar la proporción de un reactivo / metabolito acumulado en la matriz.
Alternativamente, se pueden emplear técnicas de microscopía con marcadores diferenciales nucleares y mitocondriales.
Espero que eso ayude, avíseme si desea más detalles sobre cualquier cosa.
