La tinción de Gram es la técnica desarrollada por Christian Gram [1] [2]. Es una de las formas clásicas de determinar las bacterias gram-positivas y gram-negativas. Las bacterias grampositivas tienen una capa gruesa de peptidoglicano, mientras que las bacterias gramnegativas tienen una capa delgada de peptidoglicano y una capa lipídica extra compuesta de proteínas y LPS (lipopolisacárido) que forma una membrana externa.
Imagen [3]
Las bacterias gram-positivas retienen la tinción de Gram mientras que las bacterias Gram-negativas toman la tinción de contraste. Nota: hay algunas excepciones. Algunas bacterias Gram-negativas retienen la tinción de Gram.
Procedimiento:
- Primero, hacemos un frotis de cultivo bacteriano en un portaobjetos de vidrio y lo reparamos con calor.
- Una vez que se realiza el frotis, agregamos la tinción de Gram, es decir, cristal violeta y se deja reposar de 2 a 3 minutos.
- Agregamos yodo de gramo que actúa como mordiente.
- Después de la aplicación de mordiente al frotis, lavamos el portaobjetos con etanol. El etanol actuará como decolorante y se agrega hasta que el color violeta deje de descargarse. El grampositivo retendría la mancha y las bacterias gramnegativas se decolorarían.
- Permitimos que la diapositiva se seque al aire.
- Una vez secados al aire, agregamos contratinción a la diapositiva. Las bacterias gramnegativas tomarían la contratinción (safranina).
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Imagen [4]
Mientras observamos la diapositiva debajo de la lente de inmersión en aceite (100x), podemos observar las bacterias grampositivas teñidas como violeta (o violeta) mientras que las bacterias gram-negativas se tiñen de un color rosado.
Principio:
La mancha de cristal violeta se disocia como ion violeta cristal e ion cloro. El ion cristal violeta penetraría e interactuaría con las moléculas negativamente cargadas de la membrana, como el ácido teicoico. Cuando agreguemos mordiente, es decir, yodo, formaría un gran complejo con una mancha de cristal violeta que interactuaría con la membrana interna y externa.
Gram-negativo tiene una capa muy delgada de peptidoglicano y tiene una membrana externa adicional compuesta de LPS. Cuando se agrega etanol, la membrana externa se lava y el complejo cristal violeta-yodo también se lava. Por lo tanto, las bacterias gramnegativas no retienen el cristal violeta.
Las bacterias Gram-positivas tienen una capa gruesa de peptidoglicano. Cuando se agrega etanol, la célula se deshidrataría y el complejo cristal violeta-yodo queda atrapado en su interior. Por lo tanto, las bacterias gram-positivas se tiñen con violeta cristal y aparecen de color púrpura o violeta.
La contra tinción es absorbida por las bacterias gram-positivas y gram-negativas. Pero, debido a la presencia de violeta cristal en el fondo, no se observa la tinción de safranina.
Lecturas adicionales:
- Gram, C., 1884. La tinción diferencial de Schizomycetes en secciones de tejido y en preparaciones secas. Fortschitte der Medicin , 2 , pp.185-189.
- Claus, D., 1992. Un procedimiento de tinción de Gram estandarizado. World journal of Microbiology and Biotechnology , 8 (4), pp.451-452.
- Gregersen, T., 1978. Método rápido para la distinción de bacterias Gram-negativas de Gram-positivas. Revista europea de microbiología aplicada y biotecnología , 5 (2), pp.123-127.
- Hucker, GJ y Conn, HJ, 1923. Métodos de tinción de Gram.
- Willey, JMS, Woolverton, L., Willey, CJJM, Sherwood, LM y Woolverton, CJ, 2009. Prescott, Harley y Klein, microbiología (No. Sirsi) i9788448168278).
- Tortora, GJ, Funke, BR, Case, CL y Johnson, TR, 2004. Microbiología: una introducción (Vol. 9). San Francisco, CA: Benjamin Cummings.
- Pommerville, JC, 2004. Fundamentos de la microbiología de Alcamo . Jones y Bartlett Learning.
Notas a pie de página
[1] Hans Christian Gram – Wikipedia
[2] Tinción de Gram – Wikipedia
[3] Imagen en photoshelter.com
[4] Imagen en laboratoryinfo.com