Posiblemente. Los ZFN y TALEN pueden superar los 30 pb en su orientación. CRISPR / Cas está limitado a 22 pb de segmentación y las discrepancias de punto a punto único plantean un problema. Sin embargo , la segmentación fuera de sitio de CRISPR / Cas, en virtud de su sistema de unión de nucleótidos y nucleótidos, es más predecible . Entonces, desde un punto de vista práctico, debido a que su tasa de mutación es más predecible, su orientación fuera del sitio será menor.
Fuente: Análisis de los efectos fuera del objetivo de las endonucleasas y apoptosis guiadas por ARN derivadas de CRISPR / Cas
Es poco probable que las RGEN [endonucleasas guiadas por ARN, es decir, CRISPR / Cas] separen las secuencias de ADN diana cuyo reconocimiento no sigue las reglas de emparejamiento de bases [Watson-Crick]. Por lo tanto, los sitios fuera de objetivo de los RGEN pueden predecirse más confiablemente mediante la homología de secuencia sola que los de ZFN o TALEN. La pregunta es, entonces, cuántos desajustes RGEN pueden tolerar para desencadenar la división de ADN fuera del objetivo.
En este estudio, demostramos que los RGEN inducen mutaciones fuera del objetivo en sitios con una falta de coincidencia de una sola base. Sin embargo, descubrimos que los RGEN discriminan eficientemente los sitios en el objetivo de los sitios fuera del objetivo que solo difieren en dos bases.
Puede tener problemas para seleccionar una región repetitiva, pero supongo que es un problema universal.
No trabajo con esto, pero trabajo con un experto que sí. Su predicción, en sus propias palabras:
¿Cuál es la diferencia entre liposomas y Niosomes?
… el sistema CRISPR-Cas se convertirá rápidamente en el sistema de elección,
haciendo que todos los demás sean obsoletos. Los resultados recientes sugieren que son los más eficientes (proporcionan las tasas de mutación más elevadas), más fáciles de construir, más fáciles de multiplexar, y no se ven afectados por la metilación o el estado de la cromatina de los sitios diana.
Yo agregaría que también dijo que hay valor residual en los otros sistemas en virtud de sus patentes y productos o tuberías existentes. Esto incluye no solo ZFN y TALEN, sino algunos de los otros sistemas que han estado en desarrollo.
