Dibujamos sangre humana en una jeringa heparinizada y seguimos el protocolo a continuación. La cita en la parte inferior tendrá la receta del tampón de lavado de células.
Aislamiento y lavado de eritrocitos
1) Centrifugar sangre entera a 500xg durante 10 minutos a 4 grados C.
2) Aspirar el sobrenadante (plasma) y agregar el tampón de lavado celular al sedimento de eritrocitos. Nota: Asegúrese de que el volumen de los tampones de lavado de células duplique el volumen del sedimento de eritrocitos solo.
3) Centrifugar los eritrocitos a 500xg durante 10 minutos a 4 grados C.
4) Aspirar el sobrenadante y agregar el tampón de lavado celular al sedimento de eritrocitos. Nota: Asegúrese de que el volumen de los tampones de lavado de células duplique el volumen del sedimento de eritrocitos solo.
5) Repita los pasos 3 y 4 dos veces más para un total de 3 lavados de los eritrocitos.
– Este procedimiento de lavado es adecuado para adquirir un hematocrito al 70-80% de eritrocitos de conejo, humanos o rata. No ha sido probado con eritrocitos de ratón.
– Si los eritrocitos parecen resuspenderse, aumente el tiempo de desaceleración de la centrífuga.
– La pureza de las preparaciones de eritrocitos por este método ha sido confirmada por tinción Wright y citometría de flujo.
– NO almacene eritrocitos aislados en hielo. Están bien a temperatura ambiente durante 4 a 5 horas. Necesitan ser utilizados el día del aislamiento.
