Cómo usar PCR para detectar / examinar bacterias

Básicamente, 2 formas. Si solo quieres ver si están presentes, puedes buscar la secuencia de ARNr ribosómico 16S. Esta es solo una secuencia presente en bacterias, pero no en otros organismos como eucariotas (amebas, animales y plantas) o virus. Si su PCR amplifica el ADN utilizando los cebadores (piénsese en ellos como términos de búsqueda molecular) para esa secuencia, su muestra tiene bacterias.

Si quieres saber qué son los organismos, se puede usar esa misma secuencia. Básicamente está altamente conservado en algunos puntos y muy diverso en otros. Tus primers básicamente se enganchan a los bits conservados y luego comparas las diferencias en los diversos bits con una base de datos para identificar los organismos.

Finalmente, 16S no necesariamente te dice todo lo que necesitas saber sobre su estructura o función (aparte de saber que el organismo X generalmente tiene una desagradable enzima Y). En ese caso, puede usar cebadores que recogen la codificación de ADN para cualquier rasgo que busque. De esa manera, en su lugar, puede ver si su muestra tiene genes que codifican esa enzima Y. Es muy importante señalar aquí que varias secuencias pueden codificar para la misma enzima funcional, por lo que no es tan simple como parece.

Depende de a qué te refieres con decir “examinar bacterias”

Por ejemplo, si te estás preguntando si una secuencia que te interesa se conserva en tu bacteria, puedes extraer tu ADN bacteriano y amplificarlo mediante el uso de cebadores cuya secuencia es complementaria a tu secuencia de interés (por supuesto, la longitud de los cebadores y la concentración de sal afectará la rigurosidad de su análisis, por lo que puede jugar con las condiciones de rigor ya que no sabe cuánto se conserva la secuencia. Por ejemplo, si la severidad es demasiado alta, verá el producto de amplificación solo si la secuencia está completamente conservado. Por supuesto, si es demasiado bajo, verá muchos productos de amplificación, pero pocos o ninguno de ellos será la secuencia que está buscando). Entonces, si ves el producto de amplificación (de acuerdo con las condiciones de rigor aplicadas) puedes decir que la secuencia se conserva (cuánto se puede conservar mediante análisis bionformatico que te permite comparar la secuencia de interés y tu producto de amplificación).

Durante un corto tiempo trabajé en un laboratorio que probó la carne y las verduras en busca de contaminantes. Los investigadores principales tuvieron la suerte de tener algunos buenos cebadores para EcoH157, una forma enterogemórfica de E. coli. Con estos imprimadores y algunos kits de respaldo Elisa que estaba empezando a aprender a usar en ese momento, seis de nosotros pudimos limpiar varios cientos de muestras por noche de muchas plantas empacadoras de carne en un local del Medio Oeste. Sin cubrir demasiados detalles que incumplen mi compromiso de confidencialidad, el trabajo se basó en PCR y técnicas modernas de biología molecular. Fue divertido mientras duró y realmente sentí muchas manos en el conocimiento que se me impartió. Es posible buscar una enfermedad usando la reacción de PCR altamente flexible y volvería a hacer este tipo de trabajo en un abrir y cerrar de ojos.