¿Hay alguna guía para principiantes sobre el uso de CRISPR para transfectar una línea celular con un reportero de GFP?

Supongo que quiere hacer una línea celular estable que exprese GFP. En ese caso, usar CRISPR no es necesario. La mayoría de los protocolos hacen que transfenes el plásmido con el casete de expresión de GFP y un marcador de selección para células de mamífero en tu línea celular de interés. Después de cultivar las células con el marcador de selección de fármaco, tendrá su línea celular estable de interés que expresa GFP.

CRISPR es una nucleasa dirigida guiada por ARN y solo es útil aquí si quiere poner el cassette GFP en un sitio específico en el genoma. En ese caso, idealmente tendrías secuencias cromosómicas en cualquier lado del sitio para promover la recombinación homóloga en el locus de interés. El cribado abarcaría tanto la estrategia de selección con fármacos como las células de cribado para la región correctamente integrada con la secuenciación del ADN.

Aquí hay un protocolo para hacer líneas celulares estables:

Generar líneas celulares estables