Por favor, simplifique su problema para que pueda recibir respuestas de un grupo más amplio de personas.
1. Podría proporcionar un enlace al sitio de documentación del kit
2. Elabore solo la parte donde tiene este problema. Al lisar sus células, ¿desea hacer una muestra que tenga la proteína intacta? (y puedes centrifugar los desechos)
Asumiré la condición en 2.
Nunca utilicé Tween 20 para la lisis celular. No creo que sea un buen detergente para este propósito.
- Su proteína podría estar desnaturalizada debido a la interrupción de los lisosomas, por lo que intente incluir PIC y PhoIC.
- ¿Su buffer es capaz de mantener el pH? Usar HEPES sería una buena idea. Eso me recuerda que los búferes de Good funcionan muy bien.
- CHAPS es conocido por solubilizar proteínas sin desnaturalización.
- Existen varios agentes solubilizantes de proteínas disponibles comercialmente, por ejemplo, B-PER de ThermoScientific. Pero su composición no es revelada.
- Podrías probar variaciones de RIPA, que es una especie de código abierto.
